分光光度法測試微量元素

一、錫----苯芴酮比色法

試樣經(jīng)消化后，在弱酸性溶液中四價錫離子與苯芴酮形成微溶性橙紅色絡(luò)合物，在保護性膠體存在下與標準系列比較定量。

1、酒石酸溶液(100 g/L)

2、抗壞血酸溶液(10 g/L):臨用時配制。

3、動物膠溶液(5 g/L):臨用時配制。

4、酚酞指示液(10 g/L):用乙醇溶解。

5、氨水(1+1)

6、硫酸(1+9)    

7、苯芴酮溶液(0.1g/L):稱取0.020 g苯芴酮（1,3,7一三羥基一9一苯基蒽醌)，加少量甲醇及硫酸（1+9）數(shù)滴溶解，以甲醇稀釋至200 mL。

8、錫標準使用液（10.0ppm）：

吸取 1.00mL-5.00mL試樣消化液和同量的試劑空白溶液，分別置于25mL比色管中。

吸取 0, 0.20,0.40,0.60,0.80,1.00 mL錫標準使用液(相當0,2.0,4.0,6.0,8.0,10.0ug錫)，分別置于25mL比色管中。

于試樣、消化液、試劑空白液及錫標準液中各加0.5 mL酒石酸溶液(100g/L)及1滴酚酞指示液，混勻，各加氨水(1+1)中和至淡紅色，加3 mL硫酸(1+9),1mL動物膠溶液及2.5 mL抗壞血酸溶液，再加水至25mL_，混勻，再各加2 mL苯芴酮溶液，混勻，1小時后測量，用2 cm比色杯以水調(diào)節(jié)零點，用可見分光光度計于波長490 nm處測吸光度，標準各點減去零管吸光值后，繪制標準曲線或計算直線回歸方程，試樣吸光值與曲線比較或代人方程求出含量。

二、磷

食物中的有機物經(jīng)酸氧化，使磷在酸性條件下與鉬酸銨結(jié)合生成磷鉬酸銨。此化合物被對苯二酚、亞硫酸鈉還原成藍色化合物——鑰藍。用可見分光光度計在波長660 nm處測定鑰藍的吸收光值。

1、15%硫酸溶液:  

2、鑰酸銨溶液:1g/200ml,用15%硫酸溶液稀釋。

3、亞硫酸鈉溶液:20g/100ml,臨時配制，否則可使鑰藍溶液發(fā)生混濁.

4、磷標準使用液（10.0ppm）：

吸取0.625，1.25，2.5，3.75，5，6.25 ml磷標準使用液(相當于含磷量0，5,10,20,30,40,50ug)分別置于25mL具塞試管中。

準確吸取試樣測定液2.5mL及同量的空白溶液，分別置于25ml具塞試管中。

依次加人2.5mL鉬酸溶液搖勻，靜置幾秒鐘。加人1.25 ml亞硫酸鈉溶液，1.25 mL對苯二酚溶液，搖勻。加水至刻度，混勻。靜置30分鐘以后，在分光光度計660 nm波長處測定吸光度。以測出的吸光度對磷含量繪制標準曲線。

三、鎳

試樣中的鎳用稀酸提取后，在強堿性溶液中以過硫酸銨為氧化劑，鎳與丁二酮杇形成紅褐色絡(luò)合物，與標準系列比較定量。

國標是非消化處理的，是不是稱多點就可以了，但又考慮消化時間可能太長。

1、丁二酮圬(C4H3N202,)一乙醇溶液(10g/L):    

2、酒石酸鉀鈉溶液(500 g/L)：

3、氫氧化鈉溶液(100g/L):              

4、過硫酸銨溶液(60g/L):臨用現(xiàn)配,

5、鎳標準使用液（1.0ug)：

吸取 0,1，2，4，6，8，10，12，14，16ml鎳標準使用液，分別置于25mL具塞比色管中。

吸試樣多少？

于試樣及標準管中分別依次加人1.25mL酒石酸鉀鈉溶液,3.75mL氫氧化鈉溶液,1.25mL過硫酸銨溶液，混勻，放置3 min。再各加人0.5 mL丁二酮圬一乙醇溶液，加水至25mL,混勻。放置15 min后，用3cm比色杯，以水調(diào)節(jié)零點，于可見分光光度計波長470 nm處測吸光度，繪制標準曲線比較。

四、微波消解——分光光度法測定大豆中的硼量

分別吸取0、0.5、1.5、2.5、3.5、5 、6 、7.5mL 硼標準使用液, 于25mL 比色管中；

加5mL 乙酸銨緩沖溶液, 加2.5 mL 甲亞胺溶液, 混勻, 加水至刻度, 搖勻。放置1 h , 于可見分光光度計420 nm 處,測量吸光度。

試樣用(1+1)HN3·H2O 溶液調(diào)節(jié)pH 至6.5 左右。

1、硼標準使用液(5.0ppm):               

2、氨水1+1：

3、乙酸銨緩沖溶液(pH 6.7): 取115 g 乙酸銨, 稀釋到500mL , 再加入33.5g EDTA , 混勻.

4、甲亞胺溶液(9.0 g/L): 現(xiàn)配.稱取1.8g 甲亞胺和4 g抗壞血酸, 于200mL 水中, 微熱溶解。

五、水質(zhì)硼的測定——甲亞胺-H 酸光度法

本方法的檢出濃度為 0.03ppm， 測定上限為5.0ppm(相當于10.0ppm的 HBO2) 可用于飲用水，地面水中硼的測定。錫、碲、汞與顯色試劑生成白色沉淀，鋁鈹鈦鋯釩鎵鉬(VI)生成黃色，銅、鉻生成棕黃色，鐵(III) 鐵(II)均對測定有干擾，可用EDTA加以掩蔽，鉀鈉的存在會減緩反應的速度但可延長反應時間，在6h 后再進行測定而消除干擾。

原理

在pH5.2 的鹽酸和乙酸銨緩沖溶液中，硼與甲亞胺-H 酸生成可溶于水的甲亞胺H-硼酸棕黃色化合物，其zui大吸收波長在410~420nm 處，由于顯色速度慢，6h后發(fā)色*，該化合物在30h內(nèi)穩(wěn)定。

試劑：

1、乙酸銨水溶液500g/L ： 

2、1+4 鹽酸溶液:40ml稀釋至200ml  

3、EDTA 飽和溶液: 常溫下溶解度是0.2g/L, EDTA二鈉鹽的溶解度較大，在22℃時，每100毫升水中可镕解11.1克，此溶液的濃度約為0.3moL/L-1。由于EDTA二鈉鹽水溶液中主要是H2Y2-，所以溶液的pH值接近于4.42。其溶解度比較小受溫度影響比較大長時間存放可認為其溶解度不變， 一般來說是用其鈉鹽酸化后制得飽和溶液。

4、硼標準使用液（10ppm）：

5、甲亞胺-H 酸顯色劑：準確稱取0.50g 甲亞胺-H 酸和2g 抗壞血酸溶于100mL 去離子水中，現(xiàn)用現(xiàn)配。

測定：

準確移取HBO2標準使用液0 、0.1、0.3、0.625、1.25、2.5、7.5、15ml分別移入25ml比色管；

分別加入0.50mL EDTA 飽和溶液，2.5mL鹽酸溶液(1+4) ，5.0mL 乙酸銨溶液，搖勻后準確加入6.00mL 甲亞胺-H 酸顯色劑，搖勻并用去離水稀釋至標線，搖勻。

測量靜置暗處6h后，用10mm 比色皿于可見分光光度計于420mm 波長處以空白試驗溶液作參比測定吸光度

注意事項

(1) pH 對顯色反應有影響適宜的pH 范圍在5.2~5.8

(2) 顯色劑甲亞胺-H 酸易氧化故應保存在有塑料壓蓋的棕色瓶中試劑現(xiàn)用現(xiàn)配同時加入抗壞血酸防止氧化

(3) 當HB02 濃度在6.0mg/L 時，在50mL試液中加入6.0mL 的顯色劑是*的絡(luò)合比。

(4) 硬質(zhì)玻璃中常含有硼 試樣的預處理和顯色操作不能用玻璃器皿所使用的玻璃器皿不應與試樣溶液作長時間接觸，用其他玻璃器皿時應先進行全程序空白試驗用扣除空白的方法以消除玻璃器皿的影響

(5) 配制試劑用的水均需用石英蒸餾器重蒸餾過的水或用去離子水。

六、分光光度法測定白花蛇舌草中的鈦含量

準確移取10ppm 的鈦標準使用液0, 1, 2，3, 4, 5 mL 分別置于25 mL 容量瓶中,

各加1∶1 鹽酸10mL、10% 抗壞血酸0.5 mL , 搖勻, 各加2% 二安替比林甲烷5mL , 用水稀釋至刻度, 搖勻靜置30 min 。波長為383 nm.

樣品加10% 抗壞血酸至*褪色。加2% 二安替比林甲烷5mL , 用水稀至刻度, 搖勻。

1、鈦標準使用液（10ppm）；      

2、鹽酸溶液1 mol/L：

3、二安替比林甲烷溶液2%: 準確稱取10.0g 二安替比林甲烷粉末, 用1 mol/L 的鹽酸溶液溶解并定容至500 mL。

七、水中微量硅的硅鉬藍光度法測定

硅鉬藍光度法測定硅, 一般在較高酸度下正硅酸與鉬酸銨形成β型黃色硅鉬雜多酸, 用還原劑還原成藍色硅鉬藍, 在可見分光光度計于波長810～820nm 進行光度法測定。

目前, 已知的還原劑種類很多, 且各有優(yōu)缺點, 如氯化亞錫、硫酸亞鐵銨, 還原速度快、靈敏度高, 而穩(wěn)定性差; 抗壞血酸, 硅鉬藍很穩(wěn)定, 而還原速度太慢;硫酸亞鐵和草酸混合作還原劑, 混合液穩(wěn)定時間短; 胺基萘酚磺酸, 硅鉬藍穩(wěn)定時間雖長, 但易產(chǎn)生沉淀而還原能力降低; 米吐爾-Na 2SO3 作還原劑易產(chǎn)生沉淀, 還原速度較慢且不穩(wěn)定。本文研究和配制了甲醛合次硫酸氫鈉和亞硫酸鈉混合液, 作為水中微量硅的(硅鉬藍) 光度法測定的還原劑, 實驗證明其穩(wěn)定性、還原能力、靈敏度、準確度均較好, 還原劑可保存時間較長。

標準硅使用液（20ppm）:

鉬酸銨溶液: 稱取7.2 g 鉬酸銨于50mL 燒杯中, 加10mL 蒸餾水加熱溶解, 趁熱慢慢把它加入5mL濃硫酸和11mL 濃硝酸中, 攪拌均勻, 稍冷后用水稀釋至30mL, 如有渾濁, 放置后過濾.

酒石酸溶液:21g/30ml

甲醛合次硫酸氫鈉(還原劑) 溶液: 稱取1.50 g 甲醛合次硫酸氫鈉和4.0 g 亞硫酸鈉于燒杯中, 加蒸餾水溶解至30mL, 貯于棕色帶滴管小瓶中。

測定：

準確吸取硅標準使用液0，0.2，0.5，0.7，0.9，1.2，1.5 mL 于25mL 比色管中,加入0.2ml鉬酸銨, 搖勻, 放置4～5min,然后加入0.15ml酒石酸, 搖勻, 放置2min, 再加入0.4ml還原劑, 用蒸餾水稀至刻度, 搖勻, 置于沸水浴中加熱3～5min, 取出流水冷卻至室溫, 在可見分光光度計于波長810～820nm 和1mL 比色皿中, 用試劑(或蒸餾水) 作參比,測其吸光度A值。

八、光度法同時側(cè)定磷和硅的研究

磷和硅與鉬酸銨都能生成黃色配合物, 此配合物與還原劑如能同時被還原為鉬藍, 但草酸能迅速破壞磷鉬黃, 且實驗表明, 在0～2ppm范圍內(nèi), 磷鉬藍和硅鉬藍的吸光度加合性良好。故在一定條件下, 先測出磷、硅都存在時的吸光度, 再在相同條件下, 加入草酸,測出硅鉬藍的吸光度, 二者之差即為磷鉬藍的吸光度, 然后分別在其相應的工作曲線上查出對應的磷和硅的含量。

鉬酸銨溶液(2.5﹪)：

NaF(0.24﹪)-SnCL2(0.2﹪):2.4g NaF/100ml水，再加0.2g SnCL2,當天使用。

草酸溶液（1﹪）：

硫酸（1mol/L）：

磷標準使用液（10ppm）

硅標準使用液（10ppm）

吸0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml的標準使用液于25ml比色管中，加入1.2ml硫酸（1mol/L）,2.5ml的鉬酸銨溶液, 沸水浴加熱30秒, 10ml NaF(0.24﹪)-SnCL2(0.2﹪),冷卻后稀釋至刻度，搖勻。用1cm比色皿,可見分光光度計于690nm處, 以試劑空白為參比測量吸光度.

九、鋁

試樣經(jīng)處理后，三價鋁離子在乙酸一乙酸鈉緩沖介質(zhì)中，與鉻天青S及溴化十六烷基*胺反應形成藍色三元絡(luò)合物，于640nm波長處測定吸光度并與標準比較定量。

1、1%(體積分數(shù))硫酸:0.1ml稀釋至10ml.

2、乙酸一乙酸鈉溶液:稱40.8g乙酸鈉溶于540mL水中，加3.12ml冰乙酸，調(diào)pH至5.5，用水稀釋至600mL,

3、鉻天青S溶液(0.5 g/L):

4、溴化十六烷基*胺溶液(0.2 g/L):0.04g/200ml ,必要時加熱助溶。

5、抗壞血酸溶液（10g/L）:臨用時配。

6、鋁標準使用液（1.0ppm）：

應保證試樣溶液中含1﹪硫酸.

吸取 0,0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,6.0m L鋁標準使用液(相當于含0, 0.5, 1.0,2.0,4.0,6.0ug)分別置于25mL比色管中，依次向各管中加人1mL 1%硫酸溶液。

吸取1.0 mL消化好的試樣液，置于25mL比色管中。

向標準管、試樣管、試劑空白管中依次加人8.0 ml乙酸一乙酸鈉緩沖液,1.0 ml抗壞血酸溶液，混勻，加2.0 mL溴化十六烷基*胺溶液，混勻，再加2.0mL鉻天青S溶液，搖勻后，用水稀釋至刻度。室溫放置20min后，用1cm比色杯，于分光光度計上，以零管調(diào)零點，紫外可見分光光度計于640 nm波長處測其吸光度，繪制標準曲線比較定量。

十、鋅 ----雙硫腙比色法(一次提取)

樣品經(jīng)消化后,在pH4.0～5.5時,鋅離子與雙硫腙形成紫紅色絡(luò)合物,溶于，加入硫代硫酸鈉，防止銅、汞、鉛、鉍、銀和鎘等離子干擾，與標準系列比較定量。

試劑：

1.乙酸鈉溶液(2 mol/I):稱取68 g乙酸鈉(CH,COONa·3H,O)，加水溶解后稀釋至250 mL,

2.乙酸(2mol/L):量取10.0 mL冰乙酸，加水稀釋至85mL,

3.乙酸一乙酸鹽緩沖液:乙酸鈉溶液(2 mol/L)與乙酸(2 mol/L)等量混合，此溶液pH為4. 7左右。用二硫腺一溶液(0. 1 g/L)提取數(shù)次，每次10 mL,除去其中的鋅，至層綠色不變?yōu)橹?，棄層，再用提取乙酸一乙酸鹽緩沖液中過剩的二硫蹤，至無色，棄去。

4.硫代硫酸鈉溶液(250 g/L):乙酸鈉溶液(2 mol/L)與乙酸(2 mol/L)等量混合，此溶液pH為4. 7左右。用二硫腺一溶液(0. 1 g/L)提取數(shù)次，每次10 mL,除去其中的鋅，至層綠色不變?yōu)橹梗瑮壢?，再用提取乙酸一乙酸鹽緩沖液中過剩的二硫蹤，至無色，棄去。

5. 1:1氨水

6.甲基橙指示液(2 g/L):稱取0.2 g甲基橙，用乙醇(20%)溶解并稀釋至100 Ml

7.鹽酸(2 mol/L):量取10 mL鹽酸，加水稀釋至60 mL,

8.鋅標準使用液（1.0ug）:

10. 二硫蹤一溶液(0.01g/L)。

吸取5.0～10.0mL定容的消化液和相同量的試劑空白液, 分別置于25mL比色管中；

吸取0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL鋅標準使用液(相當0、1、2、3、4、5μg鋅),分別置于25mL比色管中。

于樣品消化液、試劑空白液及鋅標準液中各加1滴甲基橙指示液，用氨水調(diào)至由紅變藍，再各加5mL乙酸-乙酸鹽緩沖液及1mL硫代硫酸鈉溶液混勻后, 各加10.0mL0雙硫腙-溶液，定容至25ml.劇烈振搖4min，靜置分層，經(jīng)脫脂棉將層濾入1cm比色杯中,以調(diào)節(jié)零點,于可見分光光度計波長530nm處測吸光度,繪制標準曲線比較。

十一、鋅試劑- 環(huán)己酮分光光度法測定乳制品奶粉中的鋅

吸取0、0.5、1.0、3.0、5.0、7.0、10.0、15.0ml鋅標準液；

各加入2滴酚紅指示劑用氫氧化鈉(40 g/L)溶液調(diào)至紅色,再用鹽酸( 1+50)調(diào)至黃色,加入0.5克抗壞血酸, 5.0ml緩沖液, 2.0 ml溶液(10 g/L)和3.0 ml鋅試劑溶液再加入1.5 ml環(huán)己酮?；靹?放置15min用1 cm 比色皿,以試劑空白為參比于可見分光光度計620 nm波長測定吸光度。

1、酚紅的乙醇溶液(1 g/L)：

2、氫氧化鈉(40 g/L)：      

3、鹽酸(1+50)：         

4、抗壞血酸

5、緩沖液：稱取42 g粒狀氫氧化鈉,溶于水, 加入155 g 硼酸, 溶解后再加純水至500 ml;所用試劑均為分析純,實驗用水為純水。

6、溶液(10 g/L)：          

7、鋅標準使用液（10.0ppm）：

8、鋅試劑溶液：紫棕色結(jié)晶性粉末。溶于乙醇和堿，溶于氫氧化鈉呈紅色，不溶于水。遇鋅生成藍色化合物，稀時為溶液，濃時為深藍色沉淀。

十二、微波消解- 紫外分光光度法測定水中總氮

取一定量水樣于聚四氟乙烯密封消解罐中, 加水至25 mL, 搖勻。

分別取0.、0.1、0.3、0.5、0.7、1.0、3.0、5.0、7.0、9.0、11.0、12.0、13.0、15.0 mL氮標準使用液于聚四氟乙烯密封消解罐中, 加水至25 mL, 搖勻。

依次加入0.50 mL H2O2 , 0.50mL 9 mol/L硫酸溶液, 加蓋密封后于微波消解爐中10檔加熱8 min, 冷卻至室溫。注入10 mm石英比色皿中, 分別在紫外可見分光光度計的220和275 nm處測定其吸光度, 用雙波長紫外分光光度法進行總氮測定。氮含量在0.024 2～9.60ppm之間時與吸光度成線性關(guān)系,以去離子水代替試樣做空白試驗。

過氧化氫是用于消解水中的有機物質(zhì)包括含氮有機物的, 因此其用量是一個重要的控制因素。實驗發(fā)現(xiàn), 在過氧化氫用量為0.40～0.80 mL之間吸光度基本保持不變,

酸性條件下, 過氧化氫具有較強的氧化性; 但酸性過強, 又不利于NH4+ 轉(zhuǎn)化為NO3- 。

1、氮標準使用液: 20 mg/L硝酸鉀標樣;

2、硫酸溶液（9 mol/L;）

3、過氧化氫溶液（0.3 g/mL）;         

4、本實驗用水均為無氨水

十三、氟——灰化蒸餾— 氟試劑比色法

試樣經(jīng)硝酸鎂固定氟，經(jīng)高溫灰化后，在酸性條件下，蒸餾分離氟，蒸出的氟被氫氧化鈉溶液吸收，氟與氟試劑、硝酸鑭作用，生成藍色三元絡(luò)合物，與標準比較定量。

本方法所用水均為不含氟的去離子水，試劑為分析純，全部試劑貯于聚乙烯塑料瓶中。

1 丙酮:需500ml.

2 鹽酸(1+11):取10mL鹽酸，加水稀釋至120mL.

3 乙酸鈉溶液(250g/L)：       

4 乙酸溶液(1mol/L):取3ml,稀釋至50mL.

5.氫氧化鈉溶液(40g/L)：

6 茜素氨羧合劑溶液: 現(xiàn)配。稱取0.19 g茜素氨羧絡(luò)合劑，加少量水及氫氧化鈉溶液(40 g/L)使其溶解，加0.125g 乙酸鈉，用乙酸溶液調(diào)節(jié)pH為5.0(紅色)，加水稀釋至500ml。

7 硝酸鎂溶液(100 g/L):

8 硝酸鑭溶液: 現(xiàn)配。稱取0.11 g硝酸斕，用少量乙酸溶液溶解，加水至約225 ml，用乙酸鈉溶液(250 g/L)調(diào)節(jié)pH為5.0，再加水稀釋至250mL。

9 緩沖液(pH4. 7):稱取30 g無水乙酸鈉，溶于400 mL水中，加22 mL冰乙酸，再緩緩加冰乙酸調(diào)節(jié)pH為4. 7，然后加水稀釋至500mL.

10 氫氧化鈉溶液(100 g/L):

11 酚酞一乙醇指示液(10 g/L):

12 硫酸(2+1):

13、氟標準使用液（5.0ppm）：

稱取混勻試樣5.00g (以鮮重計)，于30m1坩堝內(nèi)，加5.0 m L硝酸鎂溶液和0.5m L氫氧化鈉溶液(100 g/L)、使呈堿性，混勻后浸泡0.5 h，置水浴上蒸干，再低溫炭化，至*不冒煙為止，移人馬弗爐中，600度灰化6h，取出，放冷。

于坩堝中加10m L水，將數(shù)滴硫酸(2十1)慢慢加人坩堝中，防止溶液飛濺，中和至不產(chǎn)生氣泡為止。將此液移人500mL蒸餾瓶中，用20mL水分數(shù)次洗滌坩堝，并入蒸餾瓶中。

于蒸餾瓶中加60mL硫酸(2+1)，數(shù)粒無氟小玻珠，連接蒸餾裝置，加熱蒸餾。餾出液用事先盛有5 mL水、7滴~20滴氫氧化鈉溶液(100 g/L)和1滴酚酞指示液的50mL燒杯吸收，當蒸餾瓶內(nèi)溶液溫度上升至190℃時停止蒸餾(整個蒸餾時間約15 min-20 min),

取下冷凝管，用滴管加水洗滌冷凝管3次~4次，洗液合并于燒杯中。再將燒杯中的吸收液移人50 mL容量瓶中，并用少量水洗滌燒杯2次~3次，合并于容量瓶中。用鹽酸(1+11)中和至紅色剛好消失。用水稀釋至刻度，混勻。

吸取0,1.0,3.0,5.0,7.0,9.0 mL氟標準使用液(相當0,1,3，5,7，9ug氟) 于25 mL帶塞比色管中。

分別吸取試樣蒸餾液各10.0 mL于25 mL帶塞比色管中。

各加2.OmL茜素氨羧絡(luò)合劑溶液、3.0 mL緩沖液、6.0 mL丙酮、2.0 m L硝酸鑭溶液，再加水至刻度，混勻，放置20m in，以3cm比色杯(參考波長580nm)用零管調(diào)節(jié)零點，測各管吸光度，繪制標準曲線比較。